Ана Гастейер родилась в Вашингтоне, округ Колумбия. Ее мать была художником, а отец мэром Корралеса, Нью-Мексико. Она окончила «Северо-западный университет». Гастейер выступала в треппе «The Groundlings», в которой также начинали свой путь ставшие впоследствии весьма успешными комиками Мелисса МакКарти, Дженнифер Кулидж, Конан О'Брайен, Лиза Кудроу и т. д. Прежде чем она получила известность в шоу «Субботним вечером в прямом эфире» она имела малые роли в таких ситкомах как «Сайнфелд».
После шести сезонов в шоу «Субботним вечером в прямом эфире», она покинула его в 2002 году ради других проектов. Гастейер по большей части работала в театре, в частности выступала на Бродвее. Она появилась с характерными ролями в фильмах «Что могло быть хуже?», «Дрянные девчонки», «Женщины» и т. д. Она также появилась в телесериалах «Журнал мод», «Фрейзер», «Чак» и «Хорошая жена».
В 2010 году она кратко вернулась в «Saturday Night Live», появившись в выпуске с Бетти Уайт. В настоящее время она снимается в ситкоме «Пригород».