В театре Нино Манфреди дебютировал в 1947г. на Пражском фестивале молодежи и студентов в антивоенной пьесе Солима «Человек и ружье». Работал в театре «Пикколо ди Милано» вместе сВитторио Гассманом и Тино Буаззелли, играл преимущественно драматические роли. Выступал в комедийных ролях на радио, ТВ и эстраде. В кино Манфреди дебютировал как сценарист и актер в комедии Франко Дзеффирелли «Кемпинг» в 1957г.
Нино Манфреди сыграл более 100 ролей у таких режиссеров, как Дино Ризи, Дамиано Дамиани, Антонио Пьетранджелли, Луиджи Коменчини, Лина Вертмюллер, Этторе Скола, Йос Стеллинг.
На похоронах Нино Манфреди присутствовала супруга президента республики Франка Чампи. Отдать последний долг Манфреди пришли многие известные политики и деятели культуры Италии. Рядом с гробом актера был установлен экран, на котором демонстрировались отрывки из более чем 100 фильмов, в которых снимался Нино Манфреди, и видеозаписи из домашнего архива. На похоронах было немного цветов. Семья актера обратилась ко всем, кто хотел отдать последний долг ушедшему кумиру, с просьбой не тратить деньги на венки и букеты, а перевести их на счет благотворительной организации «Пробуждение», которая поддерживает тяжелобольных людей, перенесших инсульт. Сам Манфреди, пострадавший от этого недуга, последние месяцы жизни провел в больнице, тяжело переживая свою беспомощность.