Холмс учился в школе для мальчиков Академия Олбани. Кроме того, он был ведущим вокалистом местной группы под названием «Method of Groove». Интересно, что именно Холмс был тем человеком, который отправил демонстрационные записи прогрессив-рок группы «Coheed And Cambria» на лейбл «Equal Vision Records» и помог им заключить их первый контракт с этим лейблом, который привел к выпуску их первого альбома «The Second Stage Turbine Blade».
Во время своего последнего года в школе Эштон учился по стажерской программе в Нью-йоркском Театральном Институте, изучая все аспекты драматического искусства. Его театральный дебют состоялся, когда Эштона взяли на одну из главных ролей в рок-опере «Рента» (Rent) сразу же после первого прослушивания, и вместе с остальным актерским составом он отправился в национальный гастрольный тур. Он также выступал в лондонском Вест-Энде в постановке «Снежной королевы» и играл в «Рождественской песне».
В настоящее время Холмс живет в Лос-Анджелесе. В последнее время он появлялся в таких телешоу, как «Обмани меня», «Доктор Хауз», «Никита» и «C.S.I.: Место преступления», а также сыграл в фильме «Умники» и триллере «Разделитель», который вышел на экраны в 2011 году. С 2011 года снимается в сериале «Месть» в роли Тайлера Баролла.