Родился 2 июня 1978 года в Фэйрфилде, штат Коннектикут, США.
Будущий актер вырос в семье театральной актрисы и преподавателя университета. Воспитывался Джастин Лонг по строгим религиозным правилам, родители были католиками. Джастин некоторое время учился в школе иезуитов в Фейрфилде, затем в колледже. Именно здесь впервые проявилось пристрастие Лонга к театральному действию - он играет в любительских спектаклях, работает с младшими ребятами в качестве театрального инструктора.
По окончанию школы парень попал в знаменитый колледж Вассара, который готовит лучших комедийных актеров, и даже был в составе Трупы Вассара. До того, как впервые сняться в коммерческом фильме, играл в любительских картинах своих друзей. Снимался в знаменитом ужастике "Джиперс Криперс", но всю жизнь мечтал о серьезной драматической роли, которую пока что получить не удалось. Зато в комедии парня приглашают просто постоянно, как, например, в "Сумасшедшие гонки". На роль автомеханика Кевина авторы фильма искали актера, с которым у Линдсей Лохан будет не только романтический дуэт, но и комедийный. "Джастин Лонг подошел нам идеально, - рассказывают продюсеры. - Он очень талантливый актер, особенно когда речь идет о комедии
С 1992 года, в 14-летнем возрасте Джастин Лонг впервые вступил на съемочную площадку и начал с этого времени, практически без перерыва, сниматься в телесериалах. Наиболее успешным для его актерской карьеры оказался сериал "Эд" (2000-04), который снимался телекомпанией NBC.
Первая роль в кино в 1999 году - Брендон Вигер в фильме "В поисках галактики".