Глорию Стюарт заметили в театре "Pasadena Playhouse", "Universal Studios" подписала с ней контракт в 1932 году.
В молодости Стюарт была гибкой, светловолосой, популярной в сейчас забытых фильмах 1930-х годов. Наиболее запоминающиеся роли того периода — преследуемая Борисом Карлоффым в "Старом доме" (1932) и жертва Клода Рейнса в "Человеке-невидимке" (1933).
Её натура не совсем вписывалась в фильмы. И режиссёрам, и публике нужны были менее "правильные" персонажи. Она появляется в "Золотоискателях 1935" (1935), страдает в качестве жены несправедливо осужденного человека в "Узнике острова Шарк" (1936), но практически незаметна в фильмах, которые принесли известность Ширли Темпл, например "Ребекка с фермы Саннибрук" (1938).
После роли Анны Австрийской в "Трех мушкетерах" (1939) братьев Ритц и роли второго плана в "Это могло случиться и с вами" (1939) она впервые отошла от кино.
Она состоялась как художник, в 1960-е годы поставила несколько спектаклей одного актёра в Нью-Йорке, Австрии и Италии.
Снялась в нескольких фильмах в 1940-х годах, например в "Доносчике" (1944), а затем снова ушла из кино до фильма "Легенда о Лиззи Борден" (1975) и позже "Растрел" (1982).
Она сыграла роль 100-летней Роуз де Витт в "Титанике" (1997), за которую была номинирована на "Оскар" как лучшая актриса второго плана и, таким образом, стала самой старой актрисой из номинированных за всю историю академии. Благодаря "Титанику" её карьера возобновилась, позже она снялась в фильме Вима Вендерса "Отель за миллион долларов" (2000) и нескольких телевизионных шоу.
Глория Стюарт скончалась 26 сентября 2010 года на 101-м году жизни от дыхательной недостаточности в своём доме в городе Брентвуд, штат Калифорния, США.