Его первая роль на телеэкране была в фильме «Monkey Shines» в 1988 году. В 1995 году он снялся в нескольких сериях фильма «NewsRadio», в котором он сыграл эксцентричного владельца радиостанции. Благодаря этой роли он получил внимание со стороны голливудских режиссеров и поднял свой рейтинг среди начинающих актеров.
В начале 90-ых годов Стивен Рут довольно долгое время работал в образе комика. Он принимал участие в различных развлекательных передачах, ток-шоу и рекламе. В 1997 году Рут сыграл несколько небольших ролей в сериале «King of the Hill». В 1999 году актер принял участие в картине «Office Space». Там он сыграл роль чокнутого Милтона Уодамса, человека посвятившего свою жизнь работе. Спустя некоторое время Стивен Рут начал работать с такими режиссерами как братья Коен и Кевином Смитом. Рут стал одним из ведущих героев многочисленных телешоу. Помимо съемок в фильмах Стивен Рут занимается благотворительной деятельностью. В 2003 году он сделал пожертвования в размере 100 000 долларов в фонд университета штата Флориды. Благодаря этому вкладу при университете была создана актерская мастерская «Stephen Root Acting Studio».
Стивен Рут принял участие в огромном количестве фильмов. Самыми яркими его работами стали картины: «Звездный путь: Следующее поколение (сериал)», «Крокодил Данди 2», «Робот-полицейский 3», «Убийца демонов», «C.S.I. Место преступления (сериал)», «Приключения Базза Лайтера из звездной команды», «Белый олеандр», «Пережить Рождество», «Ледниковый период 2: Глобальное потепление», «Просто друзья», «Вышибалы». Последними работами актера стали роли в таких картинах как «Bob Funk», «Son of Mourning», «Солист», «Шальные деньги» и «Школа выживания». Рут за всю свою актерскую карьеру сумел воплотить на экране огромное количество разнообразных образов, начиная от набожного гражданина, заканчивая страшным преступником.